| Abstract: | 利用PCR和"Cross-species"的方法,我們已選殖出可轉譯(Encoding)mature peptide的Hamster TGF-a cDNA,因此更促使我們想以相似的方法選殖Hamster TGF-a cDNA的5'和3'的非轉譯區(Untranslational regions,UTR),因為UTR對方TGF-a此Cytokine基因的調控有很大的影響力。 在以往的實驗中我們已利用由Frohman et al(1988)所提出的Modification PCR的方法選殖5'UTR,用4種Primer選殖出一段5'UTR,即由TC1先合成第一股cDNA,再將其接上Poly-A tailing,等等第二股cDNA合成後,再用5' adaptor primer和TCamp這兩種Primer以PCR放大,所以選殖出hamster TGF-a 5'UTR(即clone TC25)。 要利用Frohmans 3'RACE protocol選殖3'UTR並不成功,因為Hamster TGF-a 3'UTR太長,若使用Non-specific primer (Oligo-dT-adaptor primer)以產生第一股含有Hamster TGF-a 3'UTR的cDNA,則產量太低,失敗率高。為了解決這個問題,我們利用Matrix plot比較Human和rat的TGF-a 3'UTR和已選殖出的Hamster TGF-a mature peptide之Coding sequence,設計出不同的Primers,經不斷測試,而選殖出第一部分的3'UTR(clone 341)。 我們採用和上述相似的方法逐漸向3端選殖,得到的Hamster TGF-.alpha. cDNA也愈趨完整。 由Hamster TGF-a cDNA clone的結果,可進一步研究TGF-a mRNA是如何調控此多功能性Cytokine的表現,其各部分的mRNA分別扮演著何種角色,進而以Hamster為動物模式(Animalmodel),利用Hamster TGF-a cDNA序列,來探討TGF-a在正常的組織、癒合中的傷口、腫瘤發展等,分別有何種生物功能。 |
