一氧化氮供給劑及內毒素對RAW264.7巨噬細胞之細胞-遺傳毒性的研究

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Title:	一氧化氮供給劑及內毒素對RAW264.7巨噬細胞之細胞-遺傳毒性的研究
Authors:	許仲岳
Contributors:	中山醫學院醫學研究所
Date:	1999
Issue Date:	2022-11-14T07:55:49Z (UTC)
Abstract:	近年來隨著工商業發達，人們生活水準也隨之提高，但車輛數量與工廠密度偏高，導致長期空氣品質不住，容易影響到人類的健康。例如空氣污染物之一的NOx C 氮氧化物)被呼吸進入人體肺的深部，可引起文氣管炎或肺氣腫，也會增加呼吸道阻力及氣喘發作比例。另外，在大氣中的時20 氧化變成硝暖，是造成酸雨的潭、茵之一。由於NO 對免疫系統的細胞毒性及遺傳毒性很少被研究，所以本研究以RAW 264. 7 macrophages 為實驗標本，加入四種不同的NO donors ' 3-morpholinosydnonimine CSIN-l) 'S-nitroso-Nacetyl- DL-penici llamine CSNAP) , S-ni trosoglutathione CGSNO) , 和sodium nitroprusside CSNP) ，或lipopolysaccharide CLPS) 來探討外生性附和內生性的對RAW 264. 7 macrophages 的細胞一遺傳毒性之影響，及觀察對細胞形態的改變。實驗方法包括有:微小核法(遺傳毒性的指標) ，細胞核分裂像數CNDI) 法'MTT 分析法(細胞毒性的指標) ，亞硝段鹽CNitrite) 測量法， CPP32 測量法一等方法。並進一步以自由基捕捉劑(Catalase 和Superoxide dismutase) 和Cytarabine CAra 一C) 研究NO 造成遺傳毒性之機轉，是否和自由基CROS) 或DNA 修復系統(DNA repair enzyme system) 有關?另外，也以Lewis lung carcinoma CLL。為實驗標本，探討SNP 3 是否和adriamycin 一樣可經由細胞凋亡(apoptosis) 方式毒殺LLC 癌細胞? 實驗結果顯示RAW 264. 7 macrophages 經四種NO donors (外生性NO) 處理後，均具統計意義地增加微小核頻率和降低細胞存活率，四種NO donors 在加藥12 小時所產生之遺傳毒性最強，亦均會降低 RAW 26是. 7 macrophages 之間DI 佳，同時可測至11 埠養液中nitrite 的釋放其統計意義地增加。這些結果顯示外生性的o donors 可經由的產生細胞一遺傳毒性。此外， SOD 和Cata1ase 會降低SNP' SIN-1 和 SNAP 之遺傳毒性，卻不影響GS悶，暗示SNP , SIN-l 和SNAP 增加微小核頻率的機轉，可能和superoxide ' hydrogen peroxide 有闕，而GSNO 可能和superoxide ' hydrogen peroxide 無閥，但尚需進一步的研究。四種自o donors 分別和Ara - C 相加並不會進一步增加微小核頻率，暗示NO donors 不是經由的clslon … repairable DNA lesions 增加微小核頻率。另外， SNP , SIN-1 和SNAP 分別與Ara-C 相加，亦不增加細胞毒性，但GSNO 具統計意義地對抗Ara-C 對RAW 264. 7 macrophages 的細胞毒性，可能和GSNO 可解離釋出GSH 有某種程度上的關遠。而在RAW 264. 7 macrophages 給與LPS 的安驗中，觀察到0.3 和 1μg/ml LPS 有統計意義的增加微小核，而LPS 處理2 小時所產生之 4 遺傳毒性最強。LPS 需在30μ g/ml 之高濃度才具統計意義的降低細胞存活率，而LPS 之細胞毒性可分別被SOD ' Catalase 或L-NA胞有統計意義的降低。LPS 亦具統計意義的增加nitrite 之釋放，此作用亦顯著的被L NA阻降低，顯示LPS 經由iNOS 途徑產生NO 0 根據這些結果可推論LPS 的細胞毒性和內生性的'superoxide 和hydrogen peroxide 有關。此外， SNP 和LPS 均會明顯改變細胞形態。為史進一步證實NO 有抗癌的作用，所以使用SNP 和ADM 研究其在LLC 的細胞毒性: SNP 和AD班皆具統計意義的降低LLC 之細胞存活率。SNP 和ADM 均會增加CPP32 的活性，此增加活性之作用會被CPP32 抑制劑CDEVD-CHO) 所降低，所以SNP 和AD阻均以細胞凋亡方式殺死LLC 癌細胞。結論是四種NO donors 均純增加RAW 264.7 macrophages 之微小核頻率，降低其存活率和核分裂僻、數，又同時均增加NOz…之形成，所以此四種NO donors 對RA有264. 7 macrophages 均透過NO 而產生細胞一遺傳毒性。由於其遺傳毒性不被Ara-C 所加強，但被自由基捕捉劑CCatalase 和Superoxide dismutase) 所減弱CGSNO 例外) ，所以其造成遺傳毒性之機轉和excision-repairable DNA lesion 無闕，而是經由含氧自由基CROS) 造成DNA 之斷裂或影響紡織體功能而增加微小核頻率。LPS 在RAW 264. 7 macrophages 造成細胞一遺傳毒性亦至少部分和NO 之生成有關。
URI:	https://ir.csmu.edu.tw:8080/handle/310902500/25153
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