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    Title: 利用Phage Display技術找出與阿滋海默症作用之胜?
    Identify novel peptides for Alzheimer's Disease through the phage display technique
    Authors: 田怡軒
    YI-XUAN TIAN
    Contributors: 口腔醫學院:口腔科學研究所;楊肇基(Jaw-Ji Yang)
    Keywords: 阿茲海默
    APP
    Date: 2021-07-01
    Issue Date: 2022-08-01T08:34:16Z (UTC)
    Abstract: Alzheimer's Disease 是一種神經退行性疾病,而且會隨著年紀的增加變得更嚴重直至死亡,此種疾病會使得患者記憶力衰退、執行能力變差、說話寫作判斷能力下降等等諸多的生理病況。我們對於篩選Alzheimer's Disease 有親和力作用的胜?序列感到很大的興趣,希望在將來能夠發展成為藥物。本實驗的目的為使用phage display C-7-C的方式找出能夠與APP結合的胜?。我們會先表現GST-C terminal APP和GST 控制組的蛋白質,將噬菌體胜?庫與與純化的蛋白質做反應,並將未結合的噬菌體洗掉再萃取出有結合的噬菌體,得到這些有反應結合的噬菌體胜?序列就可以進行DNA定序。在進行3~4的反應和定序並經過Translate tools網站的基因編碼比對,我們比對雖然沒有得到極高的重複性,但是我們找到的這些peptides可能都是與Alzheimer's Disease有相關的,以後我們還是可以拿這些peptides去做與Alzheimer's Disease有關的細胞、藥物、動物實驗,也可以修正改進phage display 實驗的過程並再次送去做DNA定序找到與APP結合反應的胜?,並利用找到重複相關性更高的胜?去做更進一步的細胞、抗體、藥物等等實驗。我們使用phage display 的方法總共得到了9個與APP可能有關的peptides本研究的目的是評估新型鈣矽為基底的骨水泥材料在迷你豬體內的成骨性,與市售商品進行比較,並且找出更適合臨床應用的骨充填材料。實驗材料包含新開發的矽酸鈣-明膠骨水泥(CSG)、矽酸鈣骨水泥(CS)和市售商品硫酸鈣半水合物骨水泥(CSH),依序進行物理化學特性以及體外和體內成骨作用的檢驗與觀察。在物理及化學特性方面除了相組成和微觀結構以外,也檢測三種骨水泥的耐沖刷性、凝固時間和徑向拉伸強度。接著使用三種細胞株分別為巨噬細胞(RAW 264.7)、人類骨肉瘤細胞株(MG 63)和人類間質幹細胞株(hMSCs)進行細胞生長、分化和礦化的體外細胞實驗,以評估骨水泥對於成骨細胞及破骨細胞的影響。最後使用迷你豬的下顎齒槽骨模型來評估骨水泥在生物體內的降解與骨生成率,在拔牙後三個月的無牙?植入三種骨水泥,並分別於植入後的第六和十二週進行組織學和組織形態學評估。
    物性化性實驗結果表示CS和CSG粉末主要由結晶性較差的β-二矽酸鈣組成,不規則的CSH粉末則具有高結晶相。水合硬化後,CS和CSG為水合矽酸鈣凝膠,而CSH表現出板狀石膏晶體結構。 CS、CSG及CSH的硬化時間分別為19、35和10分鐘;CS的抗拉強度從2.4 MPa提升到CSG 3.4 MPa;CSG具抗沖刷性而CSH則無耐沖刷性,其強度為7.6 MPa。沖刷分數分別為CSG組(1.0±0)明顯低於CS組(2.8±0.8)組和CSH組(3.6±0.5)(p<0.05)。可見添加高分子明膠能有效延長骨水泥硬化時間,同時可有效改善抗沖刷性以及增加逕向拉伸強度。
    細胞研究結果顯示MG 63和hMSCs細胞在CSG骨水泥表面的成骨活性都顯著高於CSH骨水泥表面,而巨噬細胞活性則在CSH骨水泥表現出較高活性,表示出鈣矽骨水泥有良好的成骨活性且有抑制破骨細胞活性的傾向。進一步的Micro-CT分析及組織學切片影像皆可見鈣矽骨水泥在六周後已完全降解,添加明膠可有效減緩骨水泥降解。植入十二週後,CS組的骨生成體積百分比略高於CSG和CSH組,同時可見三組骨水泥皆已完全降解。結果顯示CSG骨水泥具有較佳的抗沖刷性,在體內和體外均具有良好的成骨作用,推測其具有臨床應用的潛能,但仍須進一步的動物實驗來驗證。
    URI: https://dx.doi.org/10.6834/csmu202100217
    https://etds.csmu.edu.tw/ETDS/Home/Detail/U0003-1808202100572800
    https://hdl.handle.net/11296/kt85aj
    https://ir.csmu.edu.tw:8080/handle/310902500/22991
    Appears in Collections:[口腔科學研究所] 博碩士論文

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