蛋白質精銨酸甲基接受蛋白之研究-重組fibrillarin之甲基化分析及淋巴母細胞甲基接受蛋白之蛋白體分析; Studies of Arginine Methylaccepting Proteins -The Methylation Analysis of Methylaccepting Proteins in Lymphoblastoid Cells

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Title:	蛋白質精銨酸甲基接受蛋白之研究-重組fibrillarin之甲基化分析及淋巴母細胞甲基接受蛋白之蛋白體分析;Studies of Arginine Methylaccepting Proteins -The Methylation Analysis of Methylaccepting Proteins in Lymphoblastoid Cells
Authors:	黃宏明
Date:	2001
Issue Date:	2022-05-10T03:17:29Z (UTC)
Abstract:	蛋白質精胺酸的甲基化，常見於一些RNA 結合蛋白，且是發生於arginine-glycine-glycine (RGG) 重複的序列中，如fibri1llarin 。在之前的研究中，雖已證實fibrillarin 確為精胺酸甲基接受蛋白，但對於其發生甲基化的機制與特性，卻仍是不清楚的。在我們的實驗中，利用重組的fibrillarin '進行in vitro 甲基化反應，配合蛋白內切酶與 f1uorography 的結果，針對fibri1larin 發生於其RGG domain 中的精胺酸甲基化現象，作了進一步的探討。另外，在之前的研究，已知淋巴母細胞中富含精胺酸甲基接受蛋白，為了更進一步研究這些蛋白，在我們的實驗中，利用了蛋白體(Proteomic) 分析的技術，使用了二維膠電泳(2-dimensional gel electrophoresis)及MALDI-TOF-MS的分析，對這些蛋白作了進一步的鑑定。我們配合使用甲基轉移酶抑制劑AdOx，獲取低甲基化狀態的萃取蛋白，方便進行的in vitro 甲基化分析。將淋巴母細胞培養在加入或不加入AdOx 的環境中，取得的萃取蛋白在跑完2D gel 後，以分析軟體進行比對，但未見彼此間有顯著的差異性。而在以十AdOx 的淋巴母細胞萃取蛋白，利用重組之酵母菌甲基轉移晦RMT1 進行完in vitro 甲基化反應，以2D gel 進行分析後，根據f1uorography 的結果，取有甲基化反應的蛋白spots，使用蛋白內切晦作in gel digestion，再將產物進行MALDI-TOF-MS 的分析。之後以線上軟體，至資料庫中鑑定這些蛋白。但其中的Protein disulfide isomerase (PDI)在後績的研究中，無法進一步確認有精胺酸甲基化的反應，而另外二點鑑定出的hnRNP A2/B1，則是和過去已知的甲基化研究相符合。最後，我們並以mass 分析的資料，對hnRNP A2/Bl 發生甲基化的位置，提供了初步的證據。這或許正指引了進一步探討蛋白質甲基化的研究方向。
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