Paraquat和Diquat對老鼠肝中脂質過氧化及蛋白質glutathionation的影響

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Title:	Paraquat和Diquat對老鼠肝中脂質過氧化及蛋白質glutathionation的影響
Authors:	王世宗
Contributors:	中山醫學大學:醫研所;李宗貴
Keywords:	rats;glutathione;protein glutathionation;paraquat;diquat
Date:	1995-01-18
Issue Date:	2021-12-27T03:02:28Z (UTC)
Abstract:	為應用一可準確分析蛋白質與GSH發生mixed-disulfides(glutathionation) 的方法於動物實驗(in vivo) 中，來分析當老鼠處於過氧化緊迫(oxidative stress) 時蛋白質的變化。本計畫利用等電點電泳法(isoelectric focusing) 可分離不同等電點蛋白質的特性，結合免疫西方墨點法(Immuno-Western blotting) 的敏感性及專一性，提供一較傳統方法準確且省時的選擇。Carbonic anhydrase III(CA III)是一在雄性老鼠肝細胞中含量高且可發生glutathionation的細胞質蛋白質，所以在本實驗中被選為指標分子。過氧化緊迫分別以兩種廣效性殺草劑 paraquat(PQ) 和diquat(DQ) 經腹腔注射誘發。首先， CA III 利用兩步驟的 DEAE-trisacryl M ionexchange chrornatography純化出，其純度最少95%。其次， CA III 抗血清則經由兔子來生成O 經測試，利用此方法偵測CA III 的靈敏度可達20ng。老鼠在經PQ以20或是40mg/kg bw或DQ以85或170mg/kg bw的劑量腹腔注射5 、15 、40、120 、240分後分別犧牲取樣。 Thiobarbituric acid-reactive substances(TBARS) 均於PQ或DQ注射後顯著增加並呈現time-dependent response。血漿glutamate pyruvate transaminase(PGPT) 活性，則分別在低劑量DQ注射後240分鐘或高劑量DQ注射後的40分鐘開始顯著上升(p<0.05) ，至於接受PQ處理老鼠，其PGPT則僅於高劑量PQ(40mg/kg bw) 處理240分鐘後，顯著較對照絡為高(p<O.05)。肝細胞內GSSG濃度則不受PQ或DQ影響。還原態GSH及total GSH濃度在PQ高劑量處理240分鐘後顯著較對照姐為低(p<O.05) ,在高劑量DQ處理組則經120分鐘後，肝細胞內還原態GSH及total GSH濃度也顯著較低(p<O.05)。CA III glutathionation在所有處理組中均無顯著差異。由TBARS增加結果顯示，PQ和DQ確實在肝細胞中誘發氧化傷害，至於無法偵測到CA III glutathionation的發生，根據我們先前實驗結果(Lii， 1993) ，可能是由於glutathionated CA III發生dethiolation 的緣故，導致glutathionated CA III 在本實驗中無法偵測到有增加情形。
URI:	https://ir.csmu.edu.tw:8080/handle/310902500/21939
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